Тимофеев С.В.

Карпович Е.А.

«ФГОУ ВПО Московская государственная академия

ветеринарной медицины и биотехнологии имени К.И.Скрябина»

Изучение структуры ротовой жидкости у животных.

Ротовая жидкость достаточно давно используется в лабораторных исследованиях практикующих врачей, в том числе ветеринарных хирургов, как ранний диагностический тест поражений органов ротовой полости животных. Во врачебной практике методика ранней диагностики заболеваний зубов, слюнных желез и других органов ротовой полости посредством лабораторного исследования слюны, получила название саливадиагностики (от лат. saliva-слюна) ( Л.Г. Комарова, О. П. Алексеева, 2006; Г.Ф. Коротько,2006г.) В своей работе мы для изучения биологической жидкости (ротовой жидкости собаки) в твёрдой фазе использовали микроструктурный метод.

Данный метод позволяет на основе микроскопического исследования высушенного образца ротовой жидкости собак по форме кристаллов, их тональности, размеру, идентифицировать на ранних этапах патологические изменения в ротовой полости.

Достоинство предлагаемого метода - это простота, экономичность, информативность, атравматичность, минимальная затрата времени для постановки предварительного диагноза, отсутствие сложного диагностического оборудования.

За последние годы на кафедре ветеринарной хирургии МГАВМ и Б им. К.И. Скрябина получены дополнительные научные данные, подтверждающие важную роль слюны в поддержании гомеостаза полости рта. Выполняя множество функций ( пищеварительную, трофическую, инкреторную, экскреторную и др.) слюна обеспечивает нормальное функциональное состояние зубов и слизистой оболочки полости рта . Следует провести строгую грань между такими понятиями как слюна и ротовая жидкость. Слюна – это секрет слюнных желез, выделяющийся в ротовую полость, в то время как ротовая жидкость- это смешанная слюна, которая представляет собой суммарный секрет всех слюнных желез, включающих также детрит полости рта, микрофлору, содержимое десневых карманов, десневую жидкость, продукты жизнедеятельности микрофлоры зубного налёта, распада мигрирующих из слизистой оболочки и выделившихся со слюной лейкоцитов, остатки пищевых продуктов и др. Основу слюны составляют мицеллы, связывающие большое количество воды, в результате чего водное пространство слюны оказывается связанным и поделённым между ними. Шароподобная форма мицеллы фосфата кальция имеет ядро, по периферии которого располагаются потенциалообразующие ионы гидрофасфата, за ними следуют абсорбционный и диффузный слои, содержащие ионы кальция. Снаружи мицелла имеет плотную водно - белковую оболочку. Мицелярным строением слюны объясняется одновременное присутствие в ней несовместимых ионов.

В настоящее время существует несколько классификаций описывающих форму и тональность кристаллов, образующихся после высыхания биологической жидкости.

Так, по исследованиям Дубровиной Л.А. (1989) было выделено три типа кристаллизации биологической жидкости:

I тип - четкий рисунок удлиненных кристаллопризматических структур, сросшихся между собой и занимающих всю поверхность капли;

II тип - в центре капли видны отдельные дендритные кристаллопризматические структуры

меньших размеров, чем при I типе;

III тип - по всей капле просматривается большое количество изометрически расположенных кристаллических структур неправильной формы.

Дендрит- ( от греч. дерево) представляет собой ветвящееся и расходящееся в стороны кристаллическое образование, возникающее при ускоренной или стесненной кристаллизации в неравновесных условиях, когда ребра или вершины скелетного кристалла расщепляются по определенным законам.

По результатам своих исследований Разумова С.Н. (2007) дает следующие типы системной организации ротовой жидкости :

1- тип фаций занимающий площадь кристаллами солей на 70-75%;

2- тип фаций занимающий площадь кристаллами солей от 20-70% ;

3- тип фаций занимающий площадь кристаллами солей до 20%.

Существует метод клиновидной дегидратации ротовой жидкости по В.Н. Шабалину- С. Н. Шатохиной (2001) позволяющий визуализировать не только минеральные компоненты смешанной слюны, но и ее органическую (белковую) фракцию.

Ларина М.В.(2006) по результатам микроскопии выделяет 3 типа структуризации кристаллов слюны:

1-в центральной зоне препарата единая структура кристаллов с дендритоподобными ( древовидными) отростками, имеющими тенденцию слияния между собой. В периферической зоне 15-20 равномерных радиальных трещин. Периферическая зона широкая и свободная от кристаллов. Кристаллизация начинается в переходной зоне;

2-в центральной (солевой) зоне препарата разрозненные одиночные «крестообразные» кристаллы с меньшим количеством дендритных образований. Периферическая зона сужена, имеет как радиальные трещины так и разнонаправленные мелкие трещины. Уже в белковой зоне начинается процесс кристаллизации минеральных солей ( расширена переходная зона);

3- в центральной (солевой) зоне препарата большое количество аморфных структур, единичные разрозненные «обломки» кристаллов и дендритных образований. Периферическая ( белковая) зона узкая, в виде полоски с многочисленными, хаотически расположенными трещинами и кристаллоподобными образованиями.

К нашим исследованиям применима классификация предложенная Дубровиной Л.А. (1989).

В своей работе забор ротовой жидкости у собак мы осуществлялся при помощи стерильной Пастеровской пипетки в количестве 0,2-0,3 мл, пробу помещали на обезжиренное предметное стекло. Готовые образцы исследовали при помощи стационарного лабораторного микроскопа марки БИОЛАМ ЛОМО С1У4.2

Для более детального исследования образца ротовой жидкости нами был использован метод растровой электронной микроскопии и микрорентгеноспектрального анализ, который позволяет изучить не только структуру, но и элементный состав кристаллов в высушенной капле ротовой жидкости собаки. Работа была выполнена на приборе VEGA\\TESCAN. Условия работы прибора: напряжение 25 kV, низкий вакуум 25 Па, рабочее расстояние до объекта 25 мм. Исследованию подвергался образец в твёрдой фазе, а также различное его увеличение, необходимое для детального исследования структуры и элементного состава. Применительно к собакам данный метод анализа использован впервые.

Выводы:

Капля биологической (ротовой) жидкости обладает всеми присущими жидкости свойствами, в том числе поверхностью раздела и соответственно поверхностным натяжением;

- Процесс высыхания водной составляющей ротовой жидкости (как собственно и любого другого растворителя в двух и многофазных системах ) начинается с периферии капли и сопровождается формированием и осаждением на поверхности эпитаксиальной пленки толщиной не превышающей долей микрона;

- Рост эпитаксиальной пленки зачастую сопровождается появлением и распространением трещин При этом, фронт раздела воздух-жидкость в капле перемещается от ее периферии к ее центру. Очевидно и то, что испарение водной составляющей из капли, приводит к перенасыщению остающегося объёма жидкости растворенными в ней веществами;

- Использование микроструктурного метода исследования ротовой жидкости позволяет на ранних этапах выявить патологию, что значительно ускоряет диагностику заболевания и его лечение.

Следует отметить, что для кристаллизации твердой фазы из жидкой фазы, необходимо превышение равновесной концентрации растворенных веществ, наличия центров (зародышей) кристаллизации и определенных термодинамических условий (температуры и давления). Образование мелких кристаллов на границе раздела, термодинамически выгодно. Кроме того, на границе раздела , всегда присутствует большее количество центров зарождения кристаллов , чем в центральной области. Центральная часть капли представлена плоскими дендритообразными кристаллами вытянутыми в основном сторону центра капли.

С.В. Тимофеев, Е.А. Карпович

ФГОУ ВПО «Московская государственная академия

Ветеринарной медицины и биотехнологии

им. К. И. Скрябина»

Комплексная диагностика, применяемая для оперативного лечения

болезней зубов у собак

В последнее время в нашей стране появилось много публикаций и специализированной литературы по болезням ротовой полости у собак, однако в странах Западной Европы и США таких источников гораздо больше.

Мы предлагаем вариант комплексной диагностики пульпитов и кариеса зубов у собак, который включает в себя 3 этапа:

1) визуальная диагностика, включающая в себя осмотр, пальпацию и пр.

2) саливадиагностика - во врачебной практике методика ранней диагностики заболеваний зубов, слюнных желез и других органов ротовой полости посредством лабораторного исследования слюны, получила название саливадиагностики (от лат. saliva-слюна) ( Л.Г. Комарова, О. П. Алексеева, 2006; Г.Ф. Коротько,2006г.)

3) цифровая рентгенодиагностика с помощью визиографа. Разберем более подробно саливадиагностику и цифровую рентгенографию с применением визиографа.

Саливадиагностика- метод, позволяющий на основе микроскопического исследования высушенного образца ротовой жидкости (РЖ) собак по форме кристаллов, их тональности, размеру, идентифицировать на ранних этапах патологические изменения в ротовой полости. ( Статья в журнале «Ветеринарная Медицина» № 4, 2007, с.24)

Существует несколько классификаций, описывающих форму кристаллов, образующихся после высыхания РЖ.. По результатам наших исследований к собакам применима классификация Дубровиной Л.А. (1989) с выделением трех типов кристаллизации:

I тип - четкий рисунок удлиненных кристаллопризматических структур, сросшихся между собой и занимающих всю поверхность капли; выявлен у клинически здоровых собак.

II тип - в центре капли видны отдельные дендритные кристаллопризматические структуры

меньших размеров, чем при I типе; выявлен у собак с кариесом

III тип - по всей капле просматривается большое количество изометрически расположенных кристаллических структур неправильной формы, выявлен у собак с пульпитами.

Для более детального исследования образца ротовой жидкости нами был использован метод растровой электронной микроскопии и микрорентгеноспектрального анализ, который позволяет изучить не только структуру, но и элементный состав кристаллов в высушенной капле ротовой жидкости собаки. Пограничные выделения представляют собой хаотично расположенные мелкие кристаллы различных тезиографических форм. Морфологически их следует разделять на призмаобразные и псевдокубические формы. Размеры кристаллов около 2 мкм.

В практической деятельности ветеринарного врача стоматолога образцы РЖ возможно изучить при помощи стационарного лабораторного микроскопа различных марок.

Достоинство предлагаемого метода - это простота, экономичность, информативность, атравматичность, минимальная затрата времени для постановки предварительного диагноза, отсутствие сложного диагностического оборудования.

Диагностика с помощью цифровой рентгенографии, а именно визиографа - новое направление в российской ветеринарной стоматологии. Визиограф это - дентальная рентгеновская диагностическая система, включающая рентгеновский аппарат и высокочувствительный внутриротовой приемник изображения. Визиограф относится к оборудованию цифровой рентгенодиагностики. Применение методов цифровой рентгенографии обеспечивает мгновенное получение снимков, исключает процесс проявки рентгеновской пленки, позволяет хранить полученное изображение в электронном виде с помощью компьютера. Следует отметить что, метод традиционной рентгеновской диагностики, с использованием в качестве фиксирующего – рентгеновской пленки, ограничивает практикующего врача не только временным интервалом, в течение которого, животное находится под наркозом, но также и необходимостью повторного (многократного) облучения животного. Кроме того, скрытые кариозные полости, нельзя распознать в ротовой полости при визуальном осмотре, или же на рентгеновских снимках общего вида, поскольку они могут располагаться как в пришеечной области зуба, так и на контактных поверхностях (фиссурах) .

На качественных же рентгеновских снимках, полученных методом цифровой рентгенодиагностики, как правило, хорошо просматриваются как скрытые кариозные полости, так и их морфологические особенности. Визиограф позволяет ветеринарному врачу- стоматологу отказаться от использования рентгеновской пленки, реактивов, получать мгновенный снимок на мониторе компьютера, что значительно экономит время для диагностической оценки состояния зуба, и при этом значительно снизить лучевую нагрузку на животное. Особенно ценным является то, что есть реальная возможность оценить качество работы при эндодонтическом лечении животного.

На базе клиники кафедры ветеринарной хирургии МГАВМ и Б имени К.И. Скрябина нами проводилась работа по рентгенодиагностике коренных зубов у собак, с использованием в качестве источника рентгеновского излучения переносного рентгеновского аппарата марки «Дина-2» и, впервые применяемым для собак, системы радиовизиографии фирмы Dr.Suni с датчиком и программным обеспечением, прилагаемым к нему в комплекте с прибором.

Подводя итог, хочется сказать, что комплексная диагностика, предложенная нами в первую очередь позволяет практикующему ветеринарному врачу оперативно работать, значительно экономить время на постанову диагноза, и так же на проведение лечебных процедур по отношению к животному.

The complex diagnostics allows the practicing veterinary operative to work, vastly spare time for resolve diagnosis, and in the same way on undertaking the medical procedures to animal.